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                        科研人囊蟲病(CYT)酶聯免疫試劑盒操作步驟

                        提供者:上海雙贏生物科技有限公司   發布時間:2019/1/11  閱讀次數:103次   進入該公司展臺

                        科研人囊蟲病(CYT)酶聯免疫試劑盒操作步驟 

                        本試劑盒僅供研究使用。

                        實驗原理

                        本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人囊蟲病(CYT)表達。用純化的人囊蟲病(CYT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中囊蟲病(CYT)相結合,經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的囊蟲病(CYT)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中人囊蟲病(CYT)的存在與否。

                        科研人囊蟲病(CYT)酶聯免疫試劑盒組成

                        130倍濃縮洗滌液20ml×17終止液6ml×1

                        2酶標試劑6ml×18陽性對照0.5ml×1

                        3酶標包被板12孔×89陰性對照0.5ml×1

                        4樣品稀釋液6ml×110說明書1

                        5顯色劑A6ml×111封板膜2

                        6顯色劑B6ml×1/12密封袋1

                        標本要求

                        1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

                        2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

                        科研人囊蟲病(CYT)酶聯免疫試劑盒操作步驟

                        1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

                        2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

                        3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

                        4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

                        5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

                        6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

                        7.溫育:操作同3

                        8.洗滌:操作同5

                        9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

                        10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

                        11.測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

                        計算和結果判定:

                        試驗有效性:陽性對照孔平均值1.00;陰性對照平均值≤0.10

                        臨界值(CUTOFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

                        陰性判定:樣品OD<臨界值(CUTOFF)者為囊蟲病(CYT)陰性

                        陽性判定:樣品OD值≥臨界值(CUTOFF)者為囊蟲病(CYT)陽性。

                        注意事項

                        1.操作嚴格按照科研人囊蟲病(CYT)酶聯免疫試劑盒說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

                        2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

                        3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

                        4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

                        5.底物請避光保存。

                        6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

                        7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須

                        注意安全。

                        保存條件及有效期

                        1.試劑盒保存:2-8℃。

                        2.有效期:6個月

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