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                        小鼠β-连环蛋白(β-catenin)ELISA试剂盒使用说明书

                        • 所属分类:应用方法

                          上传时间:2017/10/10

                        • 文件类型:jpg

                          文件大小:45 KB

                        • 浏?#26469;?#25968;:2948次

                          下载次数:338次

                          需要积分:0积分

                        • 上传公司:南京森贝伽生物科?#21152;?#38480;公司进入展台
                        • 标签:

                        资料简介

                        小鼠β-连环蛋白(β-catenin)ELISA试剂盒使用说明书

                        本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中小鼠β-连环蛋白(β-catenin)含量。

                        实验原理

                        本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本小鼠β-连环蛋白(β-catenin水平。用纯化的小鼠β-连环蛋白(β-catenin抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中?#26469;?#21152;入β-连环蛋白(β-catenin),再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样?#20998;?#30340;β-连环蛋白(β-catenin?#25910;?#30456;关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标?#35760;?#32447;计算样品小鼠β-连环蛋白(β-catenin浓度。

                        试剂盒组成

                        试剂盒组成

                        48孔配置

                        96孔配置

                        保存

                        说明书

                        1

                        1

                         

                        封板膜

                        2片(48

                        2片(96

                         

                        密封袋

                        1

                        1

                         

                        酶标包被板

                        1×48

                        1×96

                        2-8℃保存

                        标准品:270pg/ml

                        0.5ml×1

                        0.5ml×1

                        2-8℃保存

                        标准品稀释液

                        1.5ml×1

                        1.5ml×1

                        2-8℃保存

                        酶标试剂

                        3 ml×1

                        6 ml×1

                        2-8℃保存

                        样品稀释液

                        3 ml×1

                        6 ml×1

                        2-8℃保存

                        显色剂A

                        3 ml×1

                        6 ml×1

                        2-8℃保存

                        显色剂B

                        3 ml×1

                        6 ml×1

                        2-8℃保存

                        终止液

                        3ml×1

                        6ml×1

                        2-8℃保存

                        20倍浓缩洗涤液

                        20ml×1

                        30ml×1

                        2-8℃保存

                         

                        样本处理及要求

                        1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

                        2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

                        3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实?#23567;?/font>

                        4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBSPH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

                        5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入?#27426;?#37327;的PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入?#27426;?#37327;的PBSPH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。分装后?#29615;?#24453;检测,其余冷冻备用。

                        6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融.

                        7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

                        操作步骤

                        1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第?#30446;祝?#20877;在第三、第?#30446;?#20998;别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第?#30446;?#20013;先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180pg/ml120pg/ml 60pg/ml30pg/ml 15pg/ml)。

                        2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀

                        3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟

                        4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

                        5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

                        6. ?#29992;福好?#23380;加入酶标试剂50μl,空白孔除外

                        7. 温育:操作同3

                        8. 洗涤:操作同5

                        9. 显色?#22909;?#23380;先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 

                        10. 终止?#22909;?#23380;加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

                        11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进?#23567;?/font>

                        注意事项:

                        1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

                        2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

                        3. 各步加样均应使用加样器,并经常校?#20113;?#20934;确性,?#21592;?#20813;试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

                        4. 请每次测定的同时做标?#35760;?#32447;,最好做?#32431;住?#22914;标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释?#21512;?#37322;?#27426;?#20493;数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

                        5. 封板膜只限一次性使用,?#21592;?#20813;交叉污?#23613;?/span>

                        6. 底物请避光保存。

                        7. ?#32454;?#25353;照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

                        8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

                        9. 本试剂不同批号组分?#22351;?#28151;用。

                        10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。


                        计算

                        ?#21592;?#20934;物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,    

                        在坐标纸上绘出标?#35760;?#32447;,根据样品的OD      

                        ?#28068;?#26631;?#35760;?#32447;查出相应的浓度;再乘以稀释      

                        倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标      

                        ?#35760;?#32447;的直线回归方程式,将样品的OD      

                        代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释      

                        倍数,即为样品的实际浓度。                  

                        标?#35760;?#32447;图   
                        (此图仅供参考) 

                         

                        试剂盒性能:

                        1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。

                        2.批内与批见应分别小于9%11%

                         

                        检测范围:                                              

                        10pg/ml - 200pg/ml                                         

                                                    

                        保存条件及有效期:

                        1.试剂盒保存:2-8

                        2.有效期:6个月

                        优质产品

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